Снижение риска повреждения транскрипции клеточных генов интеграцией ретровирусного вектора

X-биоклуб

Снижение риска повреждения транскрипции клеточных генов интеграцией ретровирусного вектора.

(всё на уровне генетического кода)

Примерная конструкция максимум безопасного кДНК вектора, которая будет интегрировать в хромосомы человека:

Пояснение сокращений:

d.U3 - изменённая последовательность ретровируса с удалёнными в ней энхансерами.

EN - энхансеры.

IRES - последовательность позволяющая эукариотическим рибосомам осуществлять трансляцию полицистронных мРНК. Рибосомы могут присоединяться к IRES последовательности во внутреннем районе мРНК и начать трансляцию.

Pack. - сигнал упаковки в вирион.

hTERT - ген фермента теломеразы.

Anti-p16/INK4a - антипоследовательность клеточного гена p16/INK4a, под контролем промотора РНК-полимеразы III.

Результаты:

Если кДНК интегрирует в не транскрибируемые части генома, то нарушений транскрипции генов в клетке не будет. (Маловероятное исключение: если кДНК попадёт в промотор между спец. регуляторными сатами перед транскрибирующей частью какого-нибудь активного гена, то может незначительно повлиять на уровень синтеза этого же клеточного белка.)

Если к ДНК интегрирует в транскрибирующие части генома (для каждой клетки эти области генома свои, но в сумме они занимают очень малую часть от всего объёма хромосомной ДНК), то вся безопасность нормальной транскрипции в клетке белков будет зависеть от места попадания кДНК:

а) при интеграции в область сплайсинга (интрона) транскрибирурующей части мРНК – сплайсинг не нарушается и лишняя часть последовательности из мРНК будет вырезана. В большинстве клеточных генов область интронов занимает где-то ~80%.

б) при интеграции в транслируемую область (кодирующую белок) – будет вызвана мутация гена. Клетка жить сможет, поскольку каждый ген в клетке представлен 4-мя копиями: 2 одинаковые пары хромосом х 2 почти схожие нити ДНК в каждой хромосоме, но 1 дефектный белок из 3-х нормальных – это уже в какой-то степени мутация. Единственный выход из этого положения – убить клетку-мутант, что и будет обеспечивать вызывающая мутацию кДНК: присутствие в дефектной мРНК последовательности IRES заставит рибосому начать трансляцию с кода токсина, накопление которого и уничтожит трансгенную клетку-мутант.

Как здесь видно, конструкция тщательно продумана и обеспечит максимум анти мутагенной безопасности трансгенным клеткам и организму.

P.S.: Данный реторовирусный вектор уже сейчас мы рассматриваем как очень перспективный вариант нашего проекта.

Ссылки:

Главная страница

Теория старения

Вся информация о Х-препарате

Регистрация новых членов в этом клубе

Для новых спонсоров

Форум

Почему наш клуб подпольный и причины нашей скрытости… (ответы на ваши вопросы с форума)